Práctica Nº2

PRÁCTICA Nº2. Análisis de la producción de ácido indolacético (AIA) en aislados de bacterias de diferentes suelos 

 

Introducción.

En análisis de la correlación entre variables es una técnica estadística muy usada en los laboratorios de investigación y se suele usar para las calibraciones de métodos experimentales, es decir, ver la respuesta analítica de un compuesto en función de la concentración. En este ejemplo, la técnica analítica que usaremos en la espectrofotometría visible, la cual se basa en la respuesta de absorción de luz en el rango del espectro visible por parte de nuestra sustancia química de interés. La variable que mediremos se denomina Absorbancia.

Nuestro caso se basa en el aislado de varios grupos de bacterias presentes en suelos agrícolas que son capaces de producir ácido indol acético (AIA), una sustancia promotora del crecimiento vegetal. Tenemos tres suelos diferentes (SUELO 1, SUELO 2 y SUELO 3), de los que a su vez hemos hecho tres extracciones a modo de réplicas. El resultado de la extracción es un cultivo bacteriano líquido en el cual queremos analizar la concentración de AIA. A su vez, para poder comparar las concentraciones entre todos los extractos, debemos referir la concentración analítica con respecto a la cantidad de proteína presente en el extracto (la cual también se basa en una técnica espectrofotométrica).

Primera parte. Calibración.

El primer paso para saber la concentración de AIA y de proteína que hay presente en los extractos, tenemos que hacer una calibración para ambos métodos. Para lo cual, preparamos dos rangos de concentración y medimos su absorbancia obteniendo los siguientes resultados:

 

Patrón IAA (μg ml-1) Absorbancia Patrón IAA (μg ml-1) Absorbancia
0 0,036 0 0,0025
5 0,111 250 0,599
10 0,229 300 0,699
15 0,325 350 0,800
20 0,450 500 1,151
Patrón Proteína (μg ml-1) Absorbancia Patrón Proteína (μg ml-1) Absorbancia
0 0 0 0
5,8 0,140 348 0,620
11,6 0,220 464 0,760
17,4 0,325 580 0,904
23,2 0,447 696 1,069

 

  1. Efectuar la regresión lineal entre los valores de la concentración y la variable absorbancia. Obtener la ecuación de la recta. Calcular el coeficiente de regresión. Calcular el error de la estimación.

 

 

Segunda parte. Medición de los aislados.

Una vez realizadas las calibraciones, por el mismo procedimiento mediremos el contenido en AIA y proteína en los extractos, obteniendo los siguientes datos:

SUELO 1 Absorbancia (AIA) Absorbancia (Proteína)
S11 0,125 0,350
S12 0,359 0,196
S13 0,269 0,235
SUELO 2
S21 0,458 0,812
S22 0,235 0,569
S23 0,470 0,832
SUELO 3
S31 0,915 1,101
S32 0,752 1,956
S33 0,893 1,099
  1. Calcular la concentración en mg ml-1 de AIA y μg ml-1 de proteína presente en cada uno de los extractos bacterianos. ¿Qué recta de calibración habrá que usar en cada caso? Justificar la respuesta.
  2. Calcular la relación AIA/proteína (mg/μl-1) para cada muestra y su intervalo de confianza con un valor de significancia del 90, 95 y 99% respectivamente.
  3. ¿Cuál es el suelo que puede producir más AIA? Justifica tu respuesta estadísticamente.

 

 

Deja un comentario

Tu dirección de correo electrónico no será publicada. Los campos obligatorios están marcados con *

*

Este sitio usa Akismet para reducir el spam. Aprende cómo se procesan los datos de tus comentarios.