Resultados del contenido de bacterias cultivables en las muestras de Tiempo 0

Esta entrada corresponde a los resultados de la segunda sesión oficial del proyecto de investigación PIIISA “Transformar residuos en recursos mediante la ciencia del compostaje”
http://www.compostandociencia.com/proyectos/proyecto-piiisa-transformar-residuos-en-recursos-mediante-la-ciencia-del-compostaje-2019-2020/

Como hemos comentado en varias ocasiones el compostaje es un proceso biológico, donde los microorganismos presentes en los biorresiduos son los que degradan y transforman la materia orgánica. La microbiología del compostaje es muy diversa y compleja, formada por numerosas familias de bacterias, actinobacterias y hongos que se suceden entre si. Aunque algunos de ellos podemos verlos a simple vista, como el micelio blanquecino de los hongos, otros no podemos verlos a simple vista a no ser que las reproduzcamos en el laboratorio. Veamos el caso de las bacterias:

Un procedimiento muy sencillo para cuantificar en número de bacterias presentes en un compost es usar la técnica de las unidades formadoras de colonias (UCF) por diluciones seriadas. Se basa en hacer una extracción acuosa del compost con suero salino (NaCl al 0,9%) e inocular placas petri con medio de cultivo enriquecido. Una vez crecidas, contamos el número de colonias que aparecen y las relacionamos con la cantidad de compost que usamos al principio. Para contar adecuadamente las colonias, debemos inocularlas con varias diluciones de dicho extracto (dilución 1:10, 1:100, 1:1000, 1:10000, …) ya que puede pasar que hayan muchas, crezcan demasiado y no podamos contarlas bien. Lo ideal es que haya entre 30 y 300 colonias por placa para poder estimarlo de forma adecuada.

Diluciones seriadas

 

En el siguiente vídeo elaborado por los compañeros de la Universidad de Salamanca puede verse de forma más clara:

 

Veamos ahora los resultados de nuestro experimento: Si recordáis, el primer día ya hicimos la extracción y la inoculación de las placas (VER ESTE ENLACE PARA RECORDARLO).

 

Dilución 4 (D4: 1:10000)
Dilución 5 (D5: 1:100000)
Dilución 6 (D6: 1:1000000)
Dilución 7 (D7: 1:10000000)

 

En la siguiente fotografía se muestran las placas petri que hizo Darién a partir de su muestra fresca. El tubo tenía una tara de 15,330 g y el peso fresco de la muestra 17,804 g. Tras añadir 30 mL de suero salino y agitarlo con el vortex durante 5-10 minutos (¡si, ese cacharro que os mola tanto!), inoculó con 30 microL las placas usando las diluciones 4 (D4: 1:10000), 5 (D5: 1:100000), 6 (D6: 1:1000000) y 7 (D7: 1:10000000). Las placas crecieron durante 24 horas a 28ºC.

Para conocer el numero de colonias de bacterias (ufc) en el compost, hay que hacer los siguientes cálculos:

  1. Elegir la placa adecuada y contar el número de colonias que hay.
  2. Multiplicar por el factor de dilución (ejemplo: si es la D5, habrá que multiplicar el ucf por 100000)
  3. Con ese dato obtendremos el número de colonias que había en 30 microL. Con una regla de tres para calcularemos las que habría inicialmente en los 30 mL iniciales (¡ojo con las unidades!)
  4. El número de colonias totales (o ufc) las dividiremos por el peso seco de la muestra (para eso tenemos que saber la humedad), expresando el resultado final por N.º de ufc por gramo de compost seco.

Y ahora, algunas preguntas para responder y pensar:

  • ¿Qué peso seco usó Darién para hacer la extracción? Nota: para saberlo, tenéis que saber la humedad de las muestras que ya calculamos en la anterior entrada del blog (VER ESTE ENLACE)
  • De las cuatro placas de la fotografía, ¿cual es la mejor para contar el número de colonias? Razona tu respuesta calculando el número de colonias de cada placa
  • ¿Qué número de colonias hay en los 30 microL que se usaron para inocular las placas?, ¿y en 30 mL?
  • ¿Cual es el resultado final?

Usar el apartado de comentarios para contestar las preguntas e iniciar una discusión sobre el tema. Podéis usar cualquier enlace para justificar vuestros resultados. ¡Suerte!

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